Purificación de una Fitohemaglutinina toxica de la caraota negra (Phaeeolus vulgaris)

Artículos, libros, monografías y colaboraciones, Werner Jaffe

Purificación de una Fitohemaglutinina toxica de la caraota negra (Phaeeolus vulgaris)

Werner G. Jaffé y Karl Gaede

Departamento de Bioquímica del Instituto Nacional de Nutrición, y del Laboratorio de Bioquímica del Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (LV.LC.)
Apartado 1827, Caracas – Venezuela

Las caraotas, al igual que otras semillas de la familia de las leguminosas contienen determinadas proteínas de notable actividad biológica (4, 3). Desde hace muchos años se conoce una fitohemaglutinina de la caraota. Recientemente Rigas y Osgood (7) describieron dos f2ctores diferentes con propiedades hemaglutinantes. otros autores (5, 2) han observado efectos tóxicos en animales alimentados con caraotas crudas o con determinados preparados obtenidos por extracción de la harina de caraotas. Aparentemente no son los factores hemaglutinantGs, preparados según el método original (7), los que causan el efecto tóxico de las caraotas crudas, ya que sus propiedades tóxicas son mínimas. Los experimentos realizados pcr uno de los autores (W. J.) han establecido también la toxicidad de las caraotas, la cual no puede imputarse al inhibidor de la tripsina (otra proteína) descrito por Eowman (1). Los autores procedieron por lo tanto a aislar los componentes tóxicos de la caraota a fin de obtener más datos acerca de sus propiedades.

La caraota negra (Phaseolus vulgaris), finamente molida, se extrae con 5 partes (p/v) de una solución al 1% de cloruro de sodio. Mediante diálisis por agua del extracto filtrado se precipita una gran cantidad de material inactivo, obteniéndose casi toda la actividad por saturación de la solución sobren9.dante con sulfato de amonio. Se preparan diferentes fracciones activas por saturación fraccionada, con la misma sal, del precipitado redisuelto.

La fracción activa principal se obtiene por precipitación, entre el 55 y 70% de saturación, del precipitado crudo dializado, previamente ajustado al pH 6,0. Repitiendo tres veces las operaciones de precipitación y redisolución, se obtiene una proteína altamente purificada con una pureza mínima del 90%, según lo revelan los métodos de electroforesis y ultracentrifugación. aparato «Spinco» modelo H, es del 8,89 x 10-5 cm2/voltios/seg. para una solución al 0,9% con amortiguador La mobilidad electroforética, determinada mediante un de barbiturato de pH 8,6 Y fuerza iónica de 0,1. El punto isoeléctrico debería encontrarse entre pH 4 Y 5. La constante de sedimentación, obtenida en nuestros experimentos, para una solución al 0,6% y con el mismo amortiguador, fué del 5,9 x 10-13 (ultracentrífuga «Spinco» modelo E). La proteína, para la cual proponemos el nombre de «faseolotoxina A», es soluble tanto en el agua como en soluciones de cloruro de sodio al 1% Y se precipita en alcohol frío .al 30%. Esta proteína contiene el 13,5% de nitrógeno (Kjeldahl) y un 5,0% de grupos reductores, según se ha determinado mediante un método modificado de Somogyi-Nelson, y según cálculos refiriéndose a glucosa. Estos valores se refieren a preparaciones secadas al aire.

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